生物技术

实验三 琼脂糖凝胶电泳及PCR产物的回收纯化

一、实验目的

1、掌握琼脂糖凝胶制备方法

2、掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA方法

3、掌握PCR产物回收和纯化方法

二、实验原理

根据DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。

电泳过程中或电泳完毕，直接利用低浓度的荧光染料EB（溴化乙锭）进行染色，EB可以嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出荧光，既可以确定DNA条带在凝胶中的位置，而且灵敏度很高，少至1～10 ng的DNA条带即可直接在紫外灯下检出。

不同浓度琼脂糖凝胶分离的范围

琼盒回收纯化PCR产物。试剂盒中有一个特制的Column，将硅胶填充到这个特制的管中，利用硅胶在高盐低pH下，吸附DNA，在低盐和高pH条件下DNA可再被洗脱的原理， 进行DNA的回收和纯化。

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此外还有玻璃奶（Glassmilk法），冻融法等方法 回收纯化DNA。

三、主要实验仪器和试剂

主要仪器：

电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、水浴锅、微波炉、离心机等。 主要实验试剂:

1、50×TAE （2 M Tris，1M 醋酸，50 mM EDTA（pH8.0））

2、10×上样缓冲液（loading buffer）

3、分子量标准 DNA Marker

4、琼脂糖