牙周炎 （CP） 是一种慢性炎症性疾病， 是由龈下微生物和宿主防御之间的稳态破坏引起[1], 当牙周组织被破坏时， 牙周袋内的微生物负荷压倒系统的主动防御机制[2].针对此种状况， 目前国内外对牙周炎的药物治疗主要是牙周袋内用药， 而此类药物主要以抗生素为主， 近几年研究显示抗生素的长期使用可加快细菌的进化， 出现耐药菌株， 也可破坏人体内正常菌群， 造成菌群失调等副作用。因此， 我们进行了紫景天总黄酮凝胶对实验性牙周炎牙周组织病理作用的相关研究。

　　1 材料与方法

　　1.1 试剂及仪器

　　二甲苯 （北京化工厂， 批号：110315） ;冰醋酸 （西陇化工股份有限公司生产， 批号：120302） ;磨牙机 （吉林大学中日联谊医院口腔科提供） ;Wistar大鼠， 体重180-230g, 雌雄各半 （吉林大学实验动物中心提供） .

　　1.2 样品的纯度、来源

　　浓度分别为1.0%、0.5%、0.25%的紫景天总黄酮凝胶；基质16%泊洛沙姆407 （吉林省中医药科学院制剂室， 批号：20120725） 以及阳性对照组药物：复方牙痛酊 （贵州同济堂制药有限公司， 批号：20120102） .

　　1.3 丝线结扎加牙龈卟啉菌感染复合法建立大鼠实验性牙周炎模型

　　取Wistar大鼠60只， 雌雄各半， 分笼圈养， 随机取出50只大鼠， 用牙龈卟啉单胞菌的盐水预处理2小时后的4号无菌丝线若干， 双股在同一位置打结3次后， 再穿过大鼠的第一和第二磨牙之间的间隙， 再将丝线环绕过第一磨牙， 于其腭侧间隙结扎， 然后打结3次， 将打好的结头埋入牙龈组织下， 以便使线结持续刺激到牙龈组织。在第3, 5, 7天将等量牙龈卟啉单胞菌的盐水注射到大鼠颊腭侧埋有丝线结头的龈下， 于处理大鼠后的第3周通过国际通用标准和观察牙龈症状评价牙龈指数并记录牙龈指数。第4周随机取动物2只， 通过获取打结部位的上颌磨牙及其牙周组织进行病理组织学观察， 以确认实验组大鼠模型的成立。

　　1.4 紫景天总黄酮对实验性牙周炎的治疗作用

　　1） 未处理的10只大鼠为正常对照组 （A组） :对牙龈不做任何处理， 其他方面同模型组大鼠。将上述大鼠实验性牙周炎模型动物随机的分成4组：模型对照组 （B组） 以及阳性对照药复方牙痛酊组 （C组） .根据紫景天总黄酮给药的剂量的不同浓度分为实验D组 （给予1.0%紫景天总黄酮） , 实验E组 （给予0.5%紫景天总黄酮） 及实验F组 （给予0.25%紫景天总黄酮） , D、E和F组分别牙龈涂擦紫景天总黄酮， 每日2次， 0.5 ml/次/只， 次间隔8h, 连续涂药14天。C组牙龈涂擦复方牙痛酊， 方法同紫景天药物实验组。

　　2） 牙龈指数 （GI） 和龈沟出血指数 （SBI） :于给药后第15天， 以3%水合氯醛10 ml/kg腹腔注射麻醉， 观察并记录药后牙龈指数及龈沟出血指数， 然后腹主动脉取血， 测量血清中的超氧化物歧化酶 （SOD） 、谷胱甘肽过氧化物酶 （GSH） 、丙二醛含量 （MDA） .

　　3） 牙周组织病理学观察：在实验开始后的第5周处死各组大鼠进行观察， 首先将获取的上颌骨标本， 经PBS （pH=7.2） 溶液清洗2遍后， 用10%甲醛固定上颌骨标本24h, 将标本浸泡在70%乙醇溶液中， 将组织修正后， 通过脱钙、梯度脱水、石蜡包埋技术处理组织， 然后将牙齿进行平行于牙长轴的近远中方向切片处理， 获取牙体牙周联合切片， 厚度约为5μm.将切片进行苏木素-伊红 （HE） 染色， 通过光镜组织学观察并记录组织学变化， 分析结果。

　　2 结果

　　2.1 外部行为观察和组织病理学检查

　　由图1结果所见， 肉眼观察：正常对照组动物 （如图A组） 牙龈色粉红， 质韧， 菲薄且紧贴牙面；模型组动物可见牙面上有大量牙石菌斑， 且牙龈色暗红质地疏松， 探之易出血， 牙周袋形成。第4周处死两只动物， 取牙及牙周组织进行病理组织学检查， 确认“牙周炎模型”复制成功。第5周开始给药， 此时模型组动物组， 牙周袋可见进一步加深， 内有食物残渣聚集， 牙龈组织出血、糜烂、溢脓等症状加重；给药两周后观察可见模型对照组 （B组） 症状加重， 紫景天药物实验组 （D、E、F组） 及阳性对照药复方牙痛酊组 （C组） 动物牙龈颜色变浅， 出血减少， 牙周袋变浅。

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　　通过本研究， 我们发现紫景天总黄酮可以减轻牙周炎的病理性损伤， 抑制牙周炎中的牙槽骨吸收。在大鼠实验性牙周炎的观察中可见对牙周炎有明显的预防和治疗作用。本研究可为众多牙周病患者带来福音， 推动长白山野生药材资源开发， 本研究成果应用前景广阔， 将对提高社会效益和经济效益具有重要的意义。

　　参考文献

　　[1]Sanz M, van Winkelhoff A J.Periodontal infections:understanding the complexity-consensus of the Seventh European Workshop on Periodontology[J].Journal of Clinical Periodontology, 2011, 38 （11） :3.　　

　　[2]Teughels W, Dekeyser C, Essche M V, et al.One-stage, fullmouth disinfection:fiction or eality?[J].Periodontology, 2009, 50 （1） :39.　　

　　[3]Duki S, Matijevi S, Dakovi D, et al.Comparison of cefixime and amoxicillin plus metronidazole in the treatment of chronic periodontitis[J].Vojnosanitetski Pregled, 2016, 73 （6） :526.　　

　　[4]Aimetti M, Perotto S, Castiglione A, et al.Prevalence of periodontitis in an adult population from an urban area in North Italy:findings from a cross-sectional population-based epidemiological survey[J].Journal of Clinical Periodontology, 2015, 42 （7） :622.