外周血DNA提取，纯化和保存

1、加40ml的1×红细胞裂解液和4-6mlEDTA抗凝外周血于50ml离心管中，混匀，直至溶液变透明。如果溶液不透明则要求3000 rpm离心后，去上清液，重复以上步骤。

2、4℃ 3000rpm离心10分钟，小心去上清液。加3ml 1×细胞核裂解液和25?l 20mg/ml蛋白酶K 于离心管中,振荡至匀,加300?l 20% SDS，摇匀，至出现粘稠透明状。37℃消化6小时以上或过夜。

3、加6ml饱和酚于15ml离心管中，将过夜的消化液加入此离心管,轻摇混匀，4℃ 3000rpm离心10分钟。

4、加等体积酚/氯仿（各3ml）至另一15ml离心管，小心移步骤3中的上清于此离心管, 混匀，4℃ 3000rpm离心10分钟。

5、加6ml氯仿于15ml离心管中，小心移步骤4中的上清于此离心管, 混匀，4℃ 3000rpm离心10分钟。

6、加10 ml无水乙醇另一15ml离心管，小心移步骤5中的上清于此离心管，摇匀，见白色絮状DNA(根据操作者的需要,可将上清分几次洗脱)。用剪掉尖头的TIP将DNA吸出。可以此保存，也可以继续溶解以进行后续试验。

7、13000rpm，20分钟离心后，用70%乙醇洗二次(第一次500ul，第二次300ul，13000rpm 离心10min)，室温干燥5分钟，再将DNA溶于200?l 1×TE中，室温溶解过夜。紫外测OD值。TE溶解的DNA，在4℃下可保存一年，如要求长期保存，则需加2倍体积无水乙醇置-70℃保存。

附：10×红细胞裂解液：

NH4Cl

82.9g（高压灭菌,4℃保存）

KHCO3 10g EDTA 0.37g 加dH2O 至1000ml

1×细胞核裂解液： 2M Tris-HCl pH8.2 0.5ml

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4M NaCl

2mM EDTA

和保存按外周血DNA提取方法2～6进行。

10ml

0.4ml

加dH2O至100ml（高压灭菌, 4℃保存）羊水细胞和淋巴细胞DNA提取、纯化