免疫学实验之凝集反应

实验1、 凝集反应(一)

免疫学实验之凝集反应

凝集反应的定义 凝集反应：颗粒性Ag或可溶性Ag(Ab)与 载体颗粒结合成的致敏颗粒，与相应Ab (Ag)发生特异性反应。在一定条件下， 形成肉眼可见的凝集现象。 直接凝集反应：颗粒性Ag,与相应Ab直接 结合。在一定条件下，形成肉眼可见的凝 集现象。 间接凝集反应：必须借助颗粒性载体，将 可溶性Ag(Ab)致敏载体，成致敏颗粒， 再检测标本中相应的Ab(Ag)。

免疫学实验之凝集反应

实验内容 直接凝集试验：玻片法 试管法 间接凝集试验：妊娠胶乳试验

免疫学实验之凝集反应

玻片法凝集反应 原理：颗粒性Ag(细菌、红细胞等),与 相应Ab直接结合。在一定条件下，形成肉 眼可见的凝集现象。 意义： 1. 定性试验，可用已知抗体的诊断血清 来测未知的抗原。 2. 可用于细菌分型、ABO血型鉴定等。

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实验方法：对照区 试验区

NS 1d 抗血清 1d 加伤寒菌液各1d 充分混匀，室温下静置数分钟，观察结果

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结果观察：1. 对照区不发生凝集，为均匀浑浊的乳状 液。 2.试验区，伤寒菌液(Ag)与相应的Ab发 生反应，出现肉眼可见的凝集块，为阳 性。 如与对照相同则为阴性。

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试管法凝集反应 原理: 用已知细菌作为一定浓度的悬液Ag, 与一系列稀释的受检血清混合，经静置保 温后观察每管内颗粒性Ag的凝集程度。

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实验方法：将待检血清作一系列倍比稀释。 管号(ml) 1 2 3 4 5 6 7 NS 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1:10血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 H菌液 各加 0.5ml 混匀，37度水浴18~24h后观察结果。 8(对照) 0.5 弃0.5

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结果观察：1. 先看对照管，应无凝集现象，轻摇试管，细菌分散 均匀， 混浊。再从第1管开始看。 2. 根据凝集度打“+”。 -: 管底无沉淀,液体混浊，细菌分散均匀。 ++++: 管底有沉淀,上液澄清，细菌全部凝集。 +++: 管底有沉淀,液体稍混, 细菌1/4不凝集。 ++: 管底有沉淀,液体混浊，细菌1/2不凝集 +: 管底仅少量有沉淀,液体混浊。 效价判断：以出现“++”凝集的最大稀释度，为 该血清的凝集效价。

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间接凝集反应(胶乳凝集抑制试验) 定义：间接凝集反应：将可溶性Ag挂在一个无 关免疫的载体(聚苯乙烯胶乳)上，制备成颗 粒Ag,与其相应的Ab相结合,为间接凝集反 应。以检测尿中HCG为例.

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胶乳凝集抑制试验 原理： +:尿含HCG+抗HCG-:尿不含HCG+抗HCG

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+HCG胶乳颗粒 +HCG胶乳颗粒

不凝集 凝集

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操作方法:在黑格反应板中,用滴管分别加入妊娠尿和生理盐水各1滴

加入抗HCG各1滴,分别用牙签混匀5分钟加入HCG胶乳各1滴,分别用牙签混匀 10-20分钟后观察结果

免疫学实验之凝集反应

结果观察: 阳性: 不出现凝集 阴性: 出现凝集