1. 目的

此SOP为Agilent 1260（Chemstation）高效液相色谱仪的操作、维护、维修及校准提供指导。 2. 范围

此SOP适用于仪器管理员和实验人员对Agilent 1260（Chemstation）高效液相色谱仪的操作、维护、维修及校准。 3. 定义 无 4. 职责

4.1 仪器管理员

4.1.1 负责对实验人员进行培训。

4.1.2 负责确保实验人员遵循此SOP中的规定。 4.1.3 负责对仪器的维修及校准。

4.1.4 登记仪器的故障检查及处理情况。 4.2 实验人员

4.2.1 按照此SOP中描述的程序进行操作和维护。 4.2.2 登记仪器使用情况和日常维护情况。

4.2.3 液相色谱仪或程序发生故障时需立即通知仪器管理员。 5. 程序

5.1 操作步骤

5.1.1 查看仪器的校验标志，未经校验的仪器不得使用。

5.1.2 检查仪器使用记录登记，了解前一次仪器使用情况及仪器完好情

况。

5.1.3 开机

5.1.3.1 准备好流动相

5.1.3.2 打开计算机电源，输入用户名和密码，进入Windows 2007画

面。

5.1.3.3 打开1260 HPLC各模块电源。双击桌面上“HPLC 1260（联

机）”图标，出现登录画面，在“登录名”中输入用户名，“密码”中输入密码，点击“确定”。工作站自动与1260 HPLC通讯，进入联机工作站画面。切换至“方法和运行控制”界面。本仪器有两名管理员，用气用户名和密码进入系统可增加用户，设定权限。可有多名实验人员，实验人员可进行方法、序列和报告的创建和修改。

5.1.4 更换色谱柱

安装色谱柱，确保管路管口顶住柱芯，旋紧螺帽。确保色谱柱的方向正确。

5.1.5 排气

5.1.5.1 把流动相放入溶剂瓶中。

5.1.5.2 检查泵密封垫清洗溶剂瓶中的15%异丙醇是否足量，是否干

净。在泵运行前，右键点击系统视图中的四元泵模块，选择“控制”，泵密封垫清洗组件下勾选“定期”，设置“周期”和“开启时间”，点击确定。

5.1.5.3 打开排气阀，为各个泵排气，设置泵的参数，右键点击四元泵

模块，勾选溶剂A，设定比例为100%，流量设为5.0

mL/min，运行2分钟后，依次用同样的方法设置溶剂B、溶剂C、溶剂D。4个泵排气完成后，每个泵比例设为25%，流量为5.0 mL/min，混合脱气2分钟，待排气完成后停泵，关闭排气阀。

5.1.6 方法，序列及数据路径及文件名的设置。

5.1.6.1 进入脱机工作站：双击桌面上“HPLC 1260（脱机）”图标，

进入脱机工作站画面。

5.1.6.2 方法：文件夹图标→“调用方法”→选择“仪器名\方法”文

件夹→新建文件夹“项目名”→在“项目名”下新建“项目”→最后一个文件夹中以当日的日期为文件名。

5.1.6.3 序列：文件夹图标→“调用序列模板”→选择“仪器名\序

列”文件夹→新建文件夹“项目名”→在“项目名”下新建“项目”→保存序列时以最后一个文件夹中以当日的日期为文件名。

5.1.6.4 数据：文件夹图标→“调用数据”→选择“仪器名\数据”文

件夹→新建文件夹“项目名”→在“项目名”下新建“项目”→在“项目”文件夹下新建当日检测文件夹→在其中新建“日期”文件夹，序列数据名保存为“001，002，......”。（仪器数据存储路径暂时无法更改）

5.1.7 新建及调用方法

5.1.7.1 新建方法

5.1.7.1.1在联机工作站画面，切换至“方法和运行控制”界面。选择“方法”菜单下的“新建方法”，调用化学工作站的缺省方法DEF.LC.M。 5.1.7.2 设置仪器参数

5.1.7.1.2.1 设置进样器：右键点击进样器模块，选择“方法”。在弹出的界面下进行如下设置：设置进样量；“针清洗”项下勾选“启用洗针”并设置洗针瓶位置；“停止时间”项下点选“与泵一致/无限制”；其他选项一般采用默认设置。

5.1.7.1.2.2 设置四元泵：右键点击四元泵模块，选择“方

法”。在弹出的界面下进行如下设置：设置流量；“溶剂”项下勾选所用溶剂，并设置溶剂百分比和名称；“停止时间”项下设置采集时间；“后运行时间”是一次运行结束后，到第二次进样前的等候时间，做梯度洗脱时，一定要设置该数值，等待系统中的流动相真正变成下一次进样的初始比例；在“时间表”处设置梯度洗脱程序，规定溶剂比例变化方式，要注意程序时间与“停止时间”和“后运行时间”之间的协调关系；其他选项一般采用默认设置。

5.1.7.1.2.3 设置柱温箱：右键点击TCC模块，选择“方法”。在弹出的界面下进行如下设置：在“温度”项下选择柱温箱左

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5.2.2 仪器的故障检查及处理方法

5.2.2.1 当排气时压力过大时(以纯水为流动相，5.0mL/min，排气时，

压力高于 5bar)，更换过滤白头。

5.2.2.2 运行时系统压力过大，检查检测器出口端是否堵塞，色谱柱是

否完好可用，导致的系统压力过高，按照此步骤进行逐一排查。

5.2.2.3 运行时压力波动过大，检查流动相过滤器是否堵塞或是排气阀

没有拧紧，导致气体进入管路造成波动，排出管路内的气体即可，如果排出气泡后仍然没有改善，使用异丙醇进行冲洗仪