基本操作

1 仪器

电子天平 恒温水浴锅 医用净化工作台 电热干燥箱

2试剂

0.125Eu/ml；0.25Eu/ml鲎 试 剂 细菌内毒素工作标准品 溶解水

注： 上述试剂低温暗处保存。

3 去除细菌内毒素

将所用器具洗净，蒸馏水淋洗后控干， 放入电热干燥箱内。

开启干燥箱，250℃1 小 时 以 上。

注： 干燥箱内器具应分层放置，除过细菌内毒素的与未去 除细菌内毒素的应有所区分。 4 灵敏度复核

每 一 批 鲎 试 剂 在 使 用 之 前 均 需 要 做 灵 敏 度 复 核 试 验。

将细菌内毒素工作标准品用水溶解在旋涡混合器上混匀15min，然后制成2λ，λ，0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30S，每一浓度平行做4支，同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管，用封口膜封口，轻摇混匀，置于安瓿架上，37℃±1℃ 水 浴 1 小 时。

5 结果判定：小心 取 出 安 瓿 架， 观 察 各 安 瓿 内 是 否 形 成 凝 胶。 将 形 成 凝 胶 的 各 安 瓿 缓 缓 倒 转， 若 凝 胶 不 变 形，不 脱 落，则为 阳 性； 若 凝 胶 不 能 保 持完 整 并 以 壁 上 脱 落， 则 为 阴 性； 不 形 成 凝 胶 者 为 阴 性。 找 出 每 排 阳 性 反 应 终 点（内 毒 素 浓 度 值）， 取 常 用 对 数， 相 加， 除 以 4 ， 再 取 反 常 用 对 数， 即 得 一 平 均 数 G ， 代 入 下 列 公 式： X = G / L （L 为 标 签 灵 敏 度）

如 果 0.5 ≤ X ≤ 2（ 连 续 三 次）， 那 么， 此 标 签 灵 敏 度 是 可 信 的。 注：1、开 启 安 瓿 前，先 用 酒 精 棉 球 将瓿 口 擦 净，开 启 时 要 小 心，避 免 玻 璃 渣 进 入 安瓿内。

内 毒 素 稀 释 过 程 中 要 注 意 混 匀。

阴 性 对 照， 必 须 呈 阴 性， 否 则 此 试 验 无 效。

6 操 作

为 了 保 证 实 验 有 效， 每 次细菌内毒素 试 验 做 抑 制 性 对 照（ 即 产 品 阳 性 对 照）。 抑 制 对 照 液 制 备 方 法 如 下： 取 0.5mL 0.5Eu/mL(或1.0Eu/ml）内 毒 素 标 准 液 注 入试管中，加入20%样品溶液0.5ml，混 匀 即 可。

为 了 检 验 所 用 溶 解 水 及 所 用 器 具 细菌内毒素 是 否 除 尽， 每 次 试 验 均 需 做 阴 性 对 照。阴性对照管为向复溶后的鲎试剂管中加入0.1ml的检查用水。实验同时做一支阳性对照管，即向复溶后的鲎试剂管中加入0.1ml的0.25Eu/ml（或0.5Eu/ml）浓度的标准溶液。

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样 品 溶 解：用 电 子 天 平 称 取 样 品, 配 成 10％ 的 供 试 液。

鲎 试 剂 溶 解：取 鲎 试 剂 安 瓿 若 干， 酒 精 棉 球 擦 拭 后 小 心 开 启， 精 确 量 取 0.1ml 溶解 水 溶 解。

混 和：分 别 移 取 0.1ml 供 试 液， 抑 制 对 照 液 及 溶解水 滴 入 对 应 安 瓿 中，封口 轻 摇 混 匀。

放 入 安瓿架 上， 置 于 37℃±1℃ 水 浴 锅中， 保 温 1 小 时

注：1、 本 实 验 在 超 净 工 作 台 上 操 作。

抑 制 对 照 液 内 毒 素 含 量 为 标 签 灵 敏 度 的 2 倍。

内 毒 素 标 准 品 溶 解 时 间 在15min 左 右。

混 和 后 安 瓿 要 轻 拿 轻 放， 以 免 出 现 假 阴 性 结 果。